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人白介素4(IL-4)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說明書
BS-0051人白介素4(IL-4)ELISA試劑盒
本試劑盒采用雙抗體夾心法，用于定量檢測(cè)人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中白介素4(IL-4)的濃度。IL-4由Th2細(xì)胞分泌，在免疫調(diào)節(jié)、B細(xì)胞增殖及抗體類別轉(zhuǎn)換中起關(guān)鍵作用^^1^^，其檢測(cè)對(duì)炎癥性疾病、過敏反應(yīng)及腫瘤研究具有重要意義。
二、檢測(cè)原理
固相包被：抗IL-4單克隆抗體預(yù)包被于微孔板，形成固相捕獲層。
抗原結(jié)合：樣本中的IL-4與固相抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。
酶標(biāo)記檢測(cè)：加入生物素化的抗IL-4抗體，再通過鏈霉親和素-HRP(辣根過氧化物酶)結(jié)合，形成二抗-酶標(biāo)復(fù)合物^^3^^。
顯色反應(yīng)：加入TMB底物，HRP催化顯色，顏色深淺與IL-4濃度呈正相關(guān)。
終止與定量：加入終止液終止反應(yīng)，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
三、試劑盒組成
組分規(guī)格(96孔)保存條件
預(yù)包被酶標(biāo)板8×12條2-8℃(避光)
凍干標(biāo)準(zhǔn)品1支-20℃(長(zhǎng)期)
標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液15ml2-8℃
生物素化檢測(cè)抗體120μl2-8℃
生物素化抗體稀釋液12ml2-8℃
鏈霉親和素-HRP12ml2-8℃
TMB顯色液(A/B)各6ml2-8℃(避光)
終止液12ml2-8℃
20×濃縮洗滌液60ml室溫(防結(jié)晶)
封板膜4張室溫
說明書1份—
四、樣本處理
血清/血漿：
采集：使用無熱原、無內(nèi)毒素試管，避免溶血或高血脂樣本。
保存：2-8℃可短期保存(≤48小時(shí))，長(zhǎng)期需冷凍(-20℃或-80℃)，避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
離心去除懸浮物，上清直接檢測(cè)或分裝保存。
組織勻漿：
稱取組織加入PBS(pH 7.4)，勻漿后離心取上清。
五、操作步驟
試劑準(zhǔn)備：
洗滌液：用蒸餾水1:20稀釋濃縮洗滌液(如1ml濃縮液+19ml蒸餾水)，室溫平衡。
標(biāo)準(zhǔn)品：加入1ml稀釋液溶解凍干標(biāo)準(zhǔn)品，配成1000pg/mL母液，按倍比稀釋(1000、500、250...0pg/mL)。
生物素化抗體：用稀釋液將濃縮抗體稀釋100倍(如10μl抗體+990μl稀釋液)。
加樣：
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃溫育90分鐘。
洗滌5次，拍干。
酶標(biāo)反應(yīng)：
加入100μL生物素化抗體，37℃溫育60分鐘。
洗滌后加入100μL鏈霉親和素-HRP，37℃溫育30分鐘。
顯色與終止：
加入100μL TMB顯色液(A/B等量混合)，避光顯色15-20分鐘。
加入50μL終止液終止反應(yīng)，30分鐘內(nèi)測(cè)定OD值。
六、注意事項(xiàng)
移液操作：
使用校準(zhǔn)的移液槍(誤差≤2%)，預(yù)潤(rùn)洗槍頭2-3次，避免交叉污染。
加樣時(shí)槍頭接觸孔壁上部，平穩(wěn)排出液體，吹盡殘余^^4^^。
試劑保存：
標(biāo)準(zhǔn)品溶解后需丟棄，不可重復(fù)使用。
TMB顯色液需避光保存，避免光照氧化。
實(shí)驗(yàn)條件：
試劑使用前需平衡至室溫(20-25℃)，避免水浴加熱。
溫育時(shí)間需一致，確保孔間溫度均衡。
注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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