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小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒實驗說明書
BS-2383 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心ELISA法，通過特異性抗體捕獲樣本中的α1-AGP，經(jīng)酶標(biāo)二抗顯色后，通過吸光度值定量檢測。
二、試劑盒組成
組分規(guī)格保存條件
預(yù)包被板條96T/48T2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干)2支-20℃
酶標(biāo)抗體1瓶2-8℃避光
顯色底物1瓶2-8℃避光
終止液1瓶室溫
三、操作步驟
樣本處理
血清/血漿：離心后取上清，避免溶血。
細(xì)胞上清：離心去除顆粒物，立即檢測或-80℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(0-1000 ng/mL)，每個濃度設(shè)復(fù)孔。
加樣與孵育
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育90分鐘。
洗滌后加入酶標(biāo)抗體，37℃孵育60分鐘。
顯色與終止
加入顯色底物避光反應(yīng)15分鐘，終止液終止反應(yīng)。
檢測
450nm波長測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。
四、注意事項
樣本要求：避免反復(fù)凍融，避免使用高脂或溶血樣本。
試劑平衡：使用前需恢復(fù)至室溫，避免冷凝水影響結(jié)果。
交叉污染：槍頭需更換，避免孔間污染。
五、性能參數(shù)
靈敏度：檢測限≤0.5 ng/mL。
回收率：85%-115%。
批間差：CV<10% 。
六、結(jié)果計算
采用四參數(shù)邏輯曲線擬合，樣本濃度=標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)值×稀釋倍數(shù)。
七、常見問題
高背景值：可能因洗滌不充分或抗體濃度過高。
線性不佳：檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋準(zhǔn)確性或孵育時間。
注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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